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蓝色琼脂糖纯化树脂是活性蓝3G通过三嗪偶联法共价连接到琼脂糖基质上的。蓝色染料能够结合多种蛋白质，如白蛋白，干扰素，脂蛋白和凝血因子等的亲和层析介质。还能够结合包括激酶，脱氢酶和大多数需要含腺苷基因子的酶。高度交联的基质提供了一个稳定的刚性的传质环境，可耐受较高流速及更高的化学稳定性。

总结合能力	每mL填料结合>18mg HSA/BSA
配体密度	约7 μmol/mL活性蓝3G介质
平均尺寸	90μm(45～165μm)
基质	6%高度交联的琼脂糖
线性流速	约200～400cm/h，300cm/h(25℃，XK50/30柱，15cm柱高)
耐压性	0.3 Mpa
pH稳定性	4～12长期，3～13(2h)
化学稳定性	40℃，70%乙醇，6M盐酸胍，8M尿素
影响因素	Tween-20等与结合缓冲液中的类似去污剂会减少结合白蛋白载量
保存液	20%乙醇

组分	规格
蓝色琼脂糖重力柱	1个
说明书	1份

保存：2～8℃


所用水和缓冲液在使用前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤以人血清白蛋白(HSA)为例。

• Binding/Wash Buffer：50mM Na2HPO4,50mM柠檬酸钠，pH7.0。
  
• Elution Buffer：50mM Na2HPO4，50mM柠檬酸钠，1-2M NaCl，pH7.0。

注意：Binding/Wash Buffer和Elution Buffer可根据样品性质进行适当改变，原则是低盐上样高盐洗脱。


样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。


Blue Beadose 6FF被广泛应用于工业纯化，下面介绍使用Blue Beadose 6FF填装层析柱的方法。
层析柱的装填(使用储液器装填)

• 用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头，确保柱底筛板上无气泡，关闭柱底出口，并在柱底部留出1~2cm的去离子水。
  
• 将树脂悬浮起来，小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
  
• 如果使用储液器，应立即在层析柱和储液器中加满水，将进样分配器放置于浆液表面，连接至泵上避免在分配器或进样管中产生气泡。
  
• 打开层析柱底部出口，开启泵使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱，然后缓慢增加至最终流速，这样可避免液压对所形成柱床的冲击，也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速，可以用你所使用泵的最大流速，这样也可以得到一个很好的装填效果。(注意：在随后的色谱程序中，不要超过最大装柱流速的75%)当柱床高度稳定后，在最后的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。
  
• 关闭泵，关闭层析柱出口。
  
• 如果使用储液器，去除储液器，将分配器置于层析柱中。
  
• 将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器，锁紧分配器接头。
  
• 将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中，开始平衡，如果需要可以重新调整分配器。

样品纯化：
Blue Beadose 6FF装填好后，可以用各种常规的中低压色谱系统。

• 将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子，将层析柱连接至色谱系统中，打开下出口将预装柱接到色谱系统中并旋紧。
  
• 用3～5倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
  
• 使用至少5倍柱床体积的Binding/Wash Buffer平衡色谱柱。
  
• 利用泵或样品环上样。
  注意：样品的粘度增加使得即使上样体积很少，也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压，使得进样器更难使用。
  
• 用Binding/Wash Buffer冲洗柱子，直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10～15个柱体积)
  
• 使用5～10倍柱体积的Elution Buffer洗脱，收集洗脱液，即目的蛋白组分。

SDS-PAGE检测：
将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE检测纯化效果。

填料清洗：
Blue Beadose 6FF纯化产品可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法：
用3～4倍柱体积的0.1M NaOH，然后用3～4倍柱体积的70%乙醇或2M硫氰酸钾溶液清洗，然后立即用5倍柱体积的Binding/Wash Buffer平衡。

去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质：
用3～4倍柱体积的70%的乙醇或30%的异丙醇或1%的Triton X-100清洗，然后立即用5倍柱体积的Binding/Wash Buffer平衡。

注意事项：

• 对于随后的色谱法，不得超过填充流速的75%。
  
• 达到恒定高度后，需要保持至少3倍床体积的填充流速，标记柱上的床高。
  
• 停止泵并关闭柱出口。
  
• 如果使用包装容器，断开储存器，并将适配器装入色谱柱。
  
• 将适配器向下推入色谱柱，直至达到标记。使溶液冲洗适配器入口，将适配器锁定到位。
  
• 将色谱柱连接到泵或色谱系统平衡，必要时重新调整适配器。

评估方法：
为了检查树脂质量和在柱的使用寿命期间对其进行监测，填充柱的分离效率应在填充后和再使用前直接进行测试，查看分离性能是否变差。体现柱效率的最佳方法是填充柱的高度是否等于理论塔板的高度，HETP和不对称因子As。通过将1%(v/v)丙酮溶液的样品应用于该填充柱，可容易地确定这些值。氯化钠也可用作测试物质，使用浓度为2.0M的NaCl水溶液测试，0.5M NaCl的水溶液作为洗脱剂。计算的板数将根据测试条件而变化，因此应仅用作参考值。条件和设备保持不变结果才具有可比性。溶质，溶剂，洗脱液，样品体积，流速，液体通道，温度等的变化会影响结果。为获得最佳效果，样品体积应的最大值不要超过柱体积的2.5%，流速在15和30cm/h之间。
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